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ELISA試劑盒屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗的機(jī)會(huì)，只需zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐，因此需經(jīng)分散才干到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號(hào)抗體與固相抗原的也相同如此。這就是為何ELISA試劑盒反響老是需求必定時(shí)刻的溫育。
有此測(cè)定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液，再在其間參加血清標(biāo)本，然后在微型震動(dòng)器上震動(dòng)1分鐘以確保混和。加酶物使用液和底物使用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液進(jìn)程敏捷完結(jié)。在ELISA檢查試劑盒中通常有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶物后。抗原抗體反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時(shí)刻，這一保溫進(jìn)程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA檢查試劑盒中似不恰當(dāng)。
ELISA試劑盒溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃（冰箱溫度）等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體的合適溫度。在樹立ELISA方法作反響動(dòng)力學(xué)研討時(shí)，實(shí)驗(yàn)標(biāo)明，兩次抗原抗體反響通常在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)品的生成可達(dá)高峰。為加快
反響，可進(jìn)步反響的溫度，有些實(shí)驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為*，在放射免疫測(cè)定中多使反響在冰箱中，以形成zui多的沉積。但因所需時(shí)刻太長(zhǎng)，在Elisa試劑盒中通常不予選用。
保溫的方式除有的ELISA試劑盒儀器附有特制的電熱塊外，通常均選用水浴，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中，ELISA試劑盒板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為避免蒸騰，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時(shí)可讓反響板漂浮在水面上。
若用保溫箱，ELISA試劑盒板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性杰出的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA試劑盒板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響，操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi)，規(guī)范室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時(shí)可根據(jù)說明書的請(qǐng)求操控溫育。室溫溫育時(shí)，ELISA試劑盒板只需平置于操作臺(tái)上即可。應(yīng)留意溫育的溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求準(zhǔn)確。為確保這一點(diǎn)，一個(gè)人操作時(shí)，一次不宜多于兩塊板一起測(cè)定。