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              小鼠 (Mouse) 解脲支原體抗體IgM (UU-IgM) ELISA 檢測試劑盒說明書
              更新時間:2012-07-05   點擊次數:1740次

              小鼠 (Mouse) 解脲支原體抗體IgM (UU-IgM) ELISA 檢測試劑盒
               

                       本試劑僅供研究使用     標本:血清或血漿

              試驗原理:
                  UU-IgM試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知UU-IgM濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將UU-IgM和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中UU-IgM的濃度呈比例關系。
                  
              試劑盒內容及其配制
              試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
              96/48人份酶標板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
              塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
              標準品:80IU/L 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書進行稀稀
              空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
              標準品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
              生物素標記的抗UU-IgM抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
              親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
              洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說明書進行稀釋
              底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
              底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
              終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
              標本稀釋液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型

              自備材料
              蒸餾水。
              加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
              振蕩器及磁力攪拌器等。

              小鼠 (Mouse) 解脲支原體抗體IgM (UU-IgM) ELISA 檢測試劑盒
               

              安全性
              避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
              實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
              不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

              操作注意事項
              試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
              實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
              不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
              使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
              使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
              洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
              底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
              加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
              按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

              小鼠 (Mouse) 解脲支原體抗體IgM (UU-IgM) ELISA 檢測試劑盒
               

              樣品收集、處理及保存方法
              血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
              血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
              細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
              組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
              保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

              試劑的準備
              標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
              80 IU/L (6號標準品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
              40 IU/L (5號標準品) 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
              20 IU/L (4號標準品) 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
              10 IU/L (3號標準品) 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
              5.0 IU/L (2號標準品) 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
              2.5 IU/L (1號標準品) 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
              0 IU/L (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

              洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。


              操作步驟
              使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
              根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
              加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
              甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
              每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
              甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
              每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
              取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
              在450nm波長處測定各孔的OD值。

              6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

              小鼠 (Mouse) 解脲支原體抗體IgM (UU-IgM) ELISA 檢測試劑盒
               

              試劑盒性能
              1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
              2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
              3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

              結 果 判 斷 與 分 析
              1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

              2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的UU-IgM標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的UU-IgM含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

              3、檢測值范圍:0-80IU/L

              4、敏感度: 0.1 IU/LKallikrein 胰激肽原酶 / 1g
              Lacmoid 間苯二酚藍 [33869-21-5] 25g
              Leishman’s stain 雷氏曼著色劑 [12627-53-1] 25g
              Light green SF 亮綠SF [5141-20-8] 25g
              Litmus 石蕊 [1393-92-6] 25g
              Mega-9 壬酰基-N-甲基葡糖糖胺 [85261-19-4] 1g
              Mepiquat chloride 縮節(jié)胺 [24307-26-4] 100g
              Methotrexate disodium salt 甲氨喋呤二鈉鹽 [7413-34-5] 5g
              Biuret 縮二脲 [108-19-0] 25g
              Patent blue A 蘭A [3486-30-4] 25g
              PEP-K 磷酸丙酮酸鉀鹽 [4265-07-0] 250mg
              pH Standard Solutions pH標準溶液 / 250ml
              pH Standard Solutions pH標準溶液 / 250ml
              pH Standard Solutions pH標準溶液 / 250ml
              Phloxine B 四溴四氯熒光素二鈉鹽 [18472-87-2] 100g
              Ponceau S 麗春紅S [6226-79-5] 25g
              Rhodamine B 羅丹明 B [81-88-9] 500g
              Rhodamine B base 羅丹明 B基 [509-34-2] 25g
              Rutin 蘆丁 [207671-50-9] 25g
              Safranin O 番紅O [477-73-6] 25g
              SDS 十二烷基硫酸鈉 [151-21-3] 250g
              SDS 十二烷基硫酸鈉 [151-21-3] 500g
              Silicon monoxide 一氧化硅 [10097-28-6] 25g
              Sudan IV 蘇丹紅4 [85-83-6] 25g
              Sudan IV 蘇丹紅4 [85-83-6] 100g
              Thio-Michler’s ketone 硫代米氏酮 [1226-46-6] 5g
              Thymine 胸腺嘧啶 [65-71-4] 25g

               

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